双光束紫外可见分光光度计工作条件的限制:

　　1、吸光度范围：可通过控制被测物浓度或改变吸收池厚度来实现吸光度合理的范围，以尽量减小测量误差。一般吸光度尽量控制在0.1-0.8范围。

　　2、狭缝宽度：狭缝宽度过大，入射光的单色性差；狭缝宽度太小，入射光的强减弱。狭缝宽度过大或过小均会造成灵敏度降低，理想选择是产生小误差情下的大狭缝。一般选用仪器的狭缝宽琶度应小于待测样品吸收带的半宽度，否则测得的吸光度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸光度不再；加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。

　　3、测量波长：在定量分析中，为了提高测定的灵敏度，入射光的波长应选择被测物的大吸收波长λmax，如果λmax有干扰，可选择另一条灵敏度稍低、但能避免干扰的谱线，所以，适当选择入射光的波长，不仅能提高测定的灵敏度，还能提高测定的准确度。

　　4、空白溶液的选择：空白溶液是用来调节吸光度测量工作零点即A=0，T=的溶液，以消除溶液中其它基体组分以及吸收池和溶剂对入射光的反射和吸收所带来的误差。根据情况不同，常用空白溶液有如下几种选择。

　　 1)溶剂空白：当溶液中只有待测组分在测定波长下有吸收，而其它组分无吸收时，可用纯溶剂作空白。

　　 2)试剂空白：如果显色剂或其它试剂有吸收，而待测试样溶液无吸收，则用不加待测组分的其它试剂作空白。

　　 3)试样空白：如果试样基体有吸收，而显色剂或其它试剂无吸收，则用不加显色剂的试样溶液作空白。